Diagnostika herpesu

Diagnóza herpes je založen na chování klasického šíření viru v citlivých buněčných kulturách, imunofluorescence a sérologické metody, provádění kolposkopických studie za použití moderních molekulárně-biologických metod (PCR, dot-hybridizace), který umožňuje diagnostikovat všechny skupiny herpesvirus, včetně HHV-6 a HHV-7 typy.

Metody laboratorní diagnostiky herpetické infekce

Hlavní metody zaměřené na vylučování HSV nebo detekci virových částic a / nebo jejich složek	Pomocné metody zaměřené na detekci protilátek proti HSV v biologických tekutinách lidského těla
Izolace HSV v citlivých kulturách buněk a zvířat Přímá a imunní elektronová mikroskopie Přímé a nepřímé možnosti MFA IFA Molekulární biologické metody Latexová aglutinační reakce	Neutralizační reakce RSK Stanovení protilátek proti nestrukturálním proteinům HSV-1,2

Ukazuje se, že 76% pacientů má genitální herpes (GH) způsobené HSV-2 a u 24% - HSV-1 typu. A GG jako monoinfekce se vyskytla pouze u 22% pacientů, v 78% případů byly zjištěny mikrobiální asociace. U 46% pacientů byla zjištěna parazitocenóza způsobená dvěma patogeny, včetně 40% případů chlamydií. Méně často se v škrábácích určují zahradnictví, Trichomonas, gonokoky.

U 27% pacientů byla parazitocenóza reprezentována třemi a 5,2% čtyřmi patogeny. Kromě toho byla častěji zaznamenána kombinace chlamydií s Gardnerella a houbami rodu Candida. Tyto údaje by potvrdilo nutnost důkladného bakteriologické vyšetření pacientů YY k identifikaci kombinace patogenů, jakož i hloubkovou studii o patogenezi smíšených infekcí urogenitálního traktu, který by umožnil diferencované komplexní terapie infekce HSV.

Materiály, které je třeba studovat při izolaci HSV v závislosti na lokalizaci herpetických lézí

Lokalizace lézí	Obsah vezikul	Oškrabávání buněk				SDC	Vysuňte z průdušek	Bioptat	Krev
		1	2	3	4
Kůže	+								+
Oči			+						+
Genitalia				+					+
Anus	+				+				+
Mouth	+	+							+
CNS	+					+		+	+
Lehké		+					+		+
Játra								+	+
Vrozený herpes	+	+	+				+		+

Metody laboratorní diagnostiky cytomegalovirové infekce

Metody	Čas potřebný k získání výsledků	Poznámky
VIRUSOLOGICKÉ
Elektronová mikroskopie	3 hodiny	Chvíli
Izolace viru v buněčné kultuře (CPD)	4-20 dní	Standardní, pomalé
Imunofluorescenční barvení časného AH s monoklonálními protilátkami	6 hodin	Méně specifické
CYTOLOGICKÉ	2-3 hodiny	Méně specifické
SEOLOGICKÉ
RSK	2 dny	Standart
Ssubsistence	1 den	Laborózní
REEF	6 hodin	Jednoduché, specifické
NFIF	6 hodin	Komplikované
RIMF	6 hodin	Komplikované
IFA (IgM, TO)	6 hodin	Rychlá, jednoduchá
Imunoblot	6 hodin	Drahé
MOLEKULÁRNÍ-BIOLOGICKÉ
MG	5-7 dní	Nákladné, časově náročné
PCR	3 hodiny	Drahé

Metody diagnostiky viru herpes zoster

Diagnostické metody	Laboratorní techniky
NEPŘÍMÉ
Přidělování	Tkáňová kultura, kuřecí embrya, laboratorní zvířata, kokultivace s permisivními buňkami nebo pomocnými viry
Identifikace izolátů	Neutralizační reakce, DSC, IF, IPPE, reakce izolátů sraženiny, aglutinace, IF
DIRECT
Cytologie	Směsi: imunofluorescenční barva
Histologie	Pathomorfologie buňky
Struktura	Embryonální mikroskopie, imunoelektronická mikroskopie
Stanovení antigenů	IF, PIÉF, RIM, IFA
Stanovení lokální produkce protilátek	IgM, IgG, IgA: IFA, RIA
Molekulární biologické přístupy	Molekulární hybridizace, PCR

Laboratorní diagnostika infekce způsobené virem herpes zoster

Diagnostické problémy	Metody	Očekávané výsledky
Akutní primární infekce	1	Detekce po 2 hodinách
	2	Hladina protilátek roste pomalu
	3	Prezentujte 3 dny po infekci
Akutní znovu aktivovaná infekce	1	Detekce ULV za 2 hodiny
	2	Hladina protilátek roste pomalu
	4	Prezentujte 4 dny po výskytu vyrážky

1. stanovení WIEF v tekutině vezikul;
2. serologie: DSC, ELISA, zaměřené na identifikaci
3. sérologie: test ELISA zaměřený na detekci IgM;
4. sérologie: test ELISA zaměřený na detekci IgA, IgM.

Metody pro indikaci imunitní odpovědi infekce v důsledku viru herpes zoster

Přístup	Metoda
Detekce zvýšeného titru protilátek ve druhém séru	RSK, RTGA, RPGA, neutralizační reakce IF, RIM, ELISA
Detekce protilátek IgG, Ig třídy specifických protilátek v prvním séru	IFA, IF, RIM, latexová aglutinace

Interpretace výsledků sérologického vyšetření séra pacienta na herpesvirové infekce (ELISA)

Název infekce / značky	Průměrné prahové hodnoty pro infekce
	Výsledky analýzy	Interpretace
Cytomegaly Anti-CMV IgG (1 až 20 E / ml) Anti-CMV IgM (100 až 300%)	Pozitivní 1-6 Pozitivní 6-10 Pozitivní> 10 Negativní Pozitivní 100-300 Negativní <90 Pochybné 90-100	Remise Zhoršení onemocnění Akutní fáze onemocnění Žádná infekce (nemoci) Akutní fáze onemocnění Opakujte analýzu po 2-3 týdnech
Herpes prostý 1,2 sérotypů Anti-HSV 1/2 celkem. (100-900%)	Pozitivní 100-400 Pozitivní 400-800 Pozitivní> 800 Negativní <100	Remise Zhoršení onemocnění Akutní fáze onemocnění Žádná infekce (onemocnění)

Tabulka uvádí hlavní metody laboratorní diagnostiky herpesvirových infekcí a také doporučuje biologické materiály, které jsou studovány v izolaci HSV, s přihlédnutím k lokalizaci herpetických lézí

Spolehlivé je rozdělení herpes simplex a CMV prostřednictvím infekce citlivých buněčných kultur. V virologickém vyšetření 26 pacientů v období recidivy byl HSV izolován na citlivé kultuře Vero buněk ve 23 případech (88,4%). V infikovaných kulturách byl pozorován vzorek cytopatického působení charakteristický pro HSV - tvorbu mnohojádrových obřích buněk nebo akumulaci zaoblených a zvětšených buněk ve formě svazků. V 52,1% případů bylo možné zjistit ohnisky cytopatického účinku viru o 16 až 24 hodin po infekci. Do 48 až 72 hodin inkubace infikovaných kultur se procento materiálů způsobujících specifickou destrukci buněk zvýšilo na 87%. A pouze v 13% případů byly pozitivní výsledky detekovány 96 hodin po infekci a více nebo s opakovaným pasáží.

Metody laboratorní diagnostiky generalizované herpetické infekce

Hlavní metody zaměřené na detekci (izolaci) herpetických virů, jejich částic a jejich složek	Pomocné metody zaměřené na detekci protilátek proti herpetickým virům v biologických tekutinách, detekce enzymatických posunů v krevním séru
Izolace viru Herpes na citlivých buněčných kulturách a zvířat s přímým a imunitní elektronové mikroskopie metody přímé a nepřímé imunoperoxidázové provedeních přímé a nepřímé volby fluorescenční technika protilátka možnosti ELISA provedeních molekulární (DNA-DNA) hybridizují polymerázové řetězové reakce reakce latexovou aglutinací	Neutralizační reakce vazby komplementu reakce latexová aglutinace Nepřímá fluorescenční metoda protilátka provedení nepřímé imunoperoxidázové metody varianta provedení ELISA metoda imunitní savý radiální fixaci Metoda komplementu Stanovení alaninu a aspartát úrovni

Pro diagnostiku infekční mononukleózy (infekce způsobené VEB) se používají sérologické metody. Reakce Paul-Bunnelya ovčími erytrocyty, titr 1:28, diagnostických a výše pro jediné studie séra, nebo zvýšení 4-násobným protilátek při zkoumání párových sér. Použijte Goff-Bauerovu reakci se suspenzí 4% formalizovaných červených krvinek koně. Po 2 minutách je výsledek zohledněn, u infekční mononukleózy je reakce velmi specifická.

V současné době se vyvíjí enzýmová imunotest (ELISA) pro diagnostiku infekční mononukleózy. V tomto případě jsou IgG a IgM protilátky v séru pacienta určeny inkubací s lymfoblasty infikovanými EBV, následovanou léčbou fluorescenčními protilátkami. V akutním období onemocnění se stanoví protilátky proti virovému kapsidovému antigenu s titrem 1: 160 a vyšším.

Při použití množství importovaných komerčních testovacích systémů v IFA může určit: protilátky proti mravenců obálky protilátek Egan EBV k časnému antigenu EBV, celkové protilátky k časné antigenu EBV, stanovené v akutní fázi onemocnění a v jádru a v cytoplazmě a omezené protilátky EBV brzy, určuje v akutní fázi onemocnění a v jádru a v cytoplasmě buněk, který je ohraničen protilátky proti EBV časný antigen, stanovených ve středu onemocnění pouze v cytoplasmě buněk a protilátek proti EBV jaderného antigenu. Pomocí těchto testovacích systémů umožňuje diferenciální diagnostiku řady onemocnění spojených s EBV.

Po kladném ELISA pro identifikaci protilátek EBV dávají imunoblotové potvrzující reakci, které detekují přítomnost protilátek pro oddělení EBV proteinové markery (P-proteiny): P23, P54, P72 (přítomnost proteinu naznačuje možnost reprodukce EBV), str 138. Said výše uvedené laboratorní metody se používají k řízení účinnosti léčby.

Citlivost virologických metod je 85-100%, specificita je 100%, doba studie je 2-5 dní. V praxi se často používá metoda přímého imunofluorescence (PIF) s polyklonálními nebo monoklonálními protilátkami proti HSV-1 a HSV-2. Metoda UIF lze snadno reprodukovat v konvenční klinické laboratoři, není nákladná, citlivost je vyšší než 80%, specificita je 90-95%. Imunofluorescenčním mikroskopie odhalila přítomnost cytoplazmatických inkluzí, morfologické znaky, procento infikovaných buněk v nátěrech, škrábanců uretry, děložního hrdla, děložní čípek, rektum.

Metoda UIF dává představu o morfologických vlastnostech buněk a změnách lokalizace HSV antigenů. Vedle přímých příznaků poškození buněk herpes viry (detekce specifické luminiscence) existují nepřímé známky herpetické infekce podle údajů UIF:

• agregace jaderné hmoty, exfoliace karyoolmy;
• přítomnost tzv. Jádra "díry", když z jádra buňky zůstává pouze jedna karyolemma;
• přítomnost intranuklových inkluzí - Caudryho lýtka.

Při nastavování UIF lékaři obdrží nejen kvalitu, ale také kvantitativní posouzení infikovaných buněk, které jsme byly použity k vyhodnocení účinnosti antivirové léčby se acyklovir (AC). Tudíž 80 pacientů s jednoduchým genitálním herpem (GG) bylo zkoumáno metodou UIF v dynamice. Je ukázáno, že v případě, před ošetřením acykloviru v nátěrech 88% pacientů mělo vysoké procento infikovaných buněk (50-75% a výše), po jednom průběhu acykloviru v nátěrech 44% pacientů se zdravými buňkami zjištěných v 31% případů jsou označeny jednotlivé infikované buňky a 25% pacientů mělo až 10% infikovaných buněk.

Obsah infikovaných buněk v roztěru (reakce PIF) u pacientů s genitálním herpesem, léčených acyklovirovým

Nemoci období	Procento v nátěrech
	Infikovaných buněk					Normální buňky
	Více než 75%	50-75%	40-50%	10%	Jednotlivé buňky v n / sp
Relaps (před léčbou)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Remise (po léčbě)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

S využitím mnoha let UIF a metodou dot-hybridizace se téměř 100% případů shodovalo s výsledky studie. Je třeba poznamenat, že za účelem zvýšení spolehlivosti diagnóze GH, a to zejména v případech, kdy existuje subklinická a malomanifestnyh formy herpes, se doporučuje použít 2-3 metodu laboratorní diagnostiky, zejména při zkoumání těhotné ženy, ženy s porodnické anamnézy znevýhodněné, lidé s nespecifikovaným gynekologické diagnózy.

Tak, pro PCR diagnostiku virových a bakteriálních infekcí urogenitálního traktu, je nutné vyhodnotit pozitivní výsledky získané s historií, přítomnost (nebo nepřítomnost) specifických klinických symptomů. Pokud je detekována chlamydie pomocí PCR, pak je možné v tomto případě mluvit o infekci a odpovídajícím způsobem řešit problémy léčby. V případě zjištění mykoplazmat (ureaplasmat) jsou oportunní patogeny, k potvrzení diagnózy je zapotřebí provést další studie kultury, t. E. Crop materiál z pacient citlivý na buněčných kulturách. Pouze v případě pozitivních výsledků v kulturní analýze lze mluvit o laboratorním potvrzení diagnózy mykoplazmózy. Stejný způsob se případně určí citlivost izolovaných mykoplazmata a často používaných dávkovacích forem (antibiotika, fluorochinolony, atd.).

Možná jednostupňová infekce s několika viry rodiny Nepresviridae. Často jsme zaznamenali infekci jednoho pacienta s viry HSV-1, HSV-2 a CMV. Ovela častěji infikované několika herpes viry byli pacienti s klinickými a laboratorními projevy sekundárního IDS (pacienti s onkohematologickými, onkologickými, infikovanými HIV). Ukazuje se tedy, že klinické a imunologické poruchy, které probíhají s infekcí HIV, jsou doprovázeny nárůstem počtu herpetických virů zjištěných molekulární hybridizací. V této prognosticky nejvýznamnější je možné považovat komplexní jednostupňovou detekci DNA typu HSV-1, CMV a HHV-6.

[1], [2], [3]